Cell stress and RNA splicing in amyotrophic lateral sclerosisnovel opportunities for therapeutic development

Resumen

La ELA es una enfermedad neurodegenerativa multifactorial. Dado que actualmente es una enfermedad incurable sin una causa conocida, los esfuerzos para descubrir nuevas dianas terapéuticas están bien justificados. La evidencia disponible indica que la fisiopatología de la ELA puede estar compuesta parcialmente de interacciones entre alteraciones de lípidos, estrés oxidativo, deslocalización de TDP-43 y metabolismo del ARN. Para explorar el impacto de la deslocalización de TDP-43, cuantificamos por primera vez el splicing críptico derivado de la disfunción de TDP-43 en tejido humano, modelos celulares y ratones. Los exones crípticos son candidatos a biomarcadores en la ELA, y los cuantificamos en otras patologías relacionadas con alteraciones de TDP-43, como la demencia tipo Alzheimer-LATE. Uno de los ARNm controlados por TDP-43 codifica para ATG4B, una proteína esencial en la formación de la maquinaria de membrana de la autofagia. Por otro lado, las membranas del sistema nervioso central están enriquecidas en ácidos grasos poliinsaturados (PUFA), muy sensibles al estrés oxidativo. Las publicaciones anteriores del grupo demuestran una disminución en el ácido docosahexaenoico (DHA) -un PUFA- en la médula espinal de los donantes de ELA. El DHA es un regulador crucial de la inflamación y se ha relacionado con enfermedades neurodegenerativas relacionadas con la edad. Esta tesis muestra que la intervención dietética puede aumentar eficazmente el contenido de DHA de la médula espinal mediante el uso de una dieta enriquecida con DHA, que tiene un efecto beneficioso en la supervivencia de los ratones transgénicos machos. Esta mejora se asoció con una disminución de los marcadores inflamatorios y de daño del ADN. Debido a que se observa un daño en el ADN similar y un perfil de liberación de citocinas en el perfil secretor asociado a la senescencia (SASP) en la neuroinflamación, también examinamos el papel potencial de la senescencia en la ELA. Detectamos niveles aumentados de marcadores SASP y signos de senescencia celular (expresión aumentada de p16-INK y p21) en etapas presintomáticas y sintomáticas en la médula espinal de los ratones hSOD1-G93A. Sin embargo, el tratamiento senolítico con Navitoclax (un inhibidor de Bcl-2) no ofreció ningún beneficio en la supervivencia de los ratones ni una disminución de los niveles de expresión de genes de senescencia celular y marcadores SASP. También demostramos que el splicing críptico aumenta en ratones hSOD1-G93A en la etapa final y se correlaciona con el marcador de senescencia p16-INK. Por último, para mejorar el potencial de transferencia, exploramos las alteraciones del splicing críptico y cambios metabolómicos como potenciales biomarcadores periféricos. Desafortunadamente, los exones crípticos medidos en tejido nervioso no se expresan en células mononucleares de sangre periférica. No obstante, los análisis del metaboloma plaquetario revelaron cambios significativos en los enfoques de casos-controles y de pronóstico. En conclusión, esta tesis destaca los hallazgos novedosos relacionados con posibles intervenciones dietéticas y senolíticos, y propone nuevos biomarcadores metabolómicos y transcriptómicos.