Analisis del anudamiento del adn intracelular

Resumen

Esta tesis doctoral constituye un reto de investigación novedoso y original por dos motivos. Primero, se trata del primer estudio sobre nudos de ADN en cromatina nativa y abre, por lo tanto, un campo nuevo en el estudio de la topología del genoma en eucariotas. Segundo, el tipo de experimentos y análisis realizados ha conllevado el desarrollo de nuevas metodologías para el estudio de la topología del ADN intracelular. Los resultados obtenidos durante la tesis proporcionan la primera evidencia de nudos de ADN en células eucarióticas La probabilidad de anudamiento y la complejidad de los nudos es resultado de la actividad aleatoria de la topoisomerasa II y la confomación espacial de la cromatina. La probabilidad de anudamiento del ADN intracelular es máxima en dominios de 20-25 nucleosomas y tiene a atenuarse en dominios mayores. Esta inflexión puede reflejar una fractalización de la estructura de la cromatina. La compactación de las fibras de cromatina, como consecuencia del supercoiling positivo que puede aumularse durante la transcripción y replicación, aumenta la probabilidad de anudamiento del ADN hasta 10-25 veces. Además, se ha desarollado un nuevo método de electroforesis que permite el análisis cuantitativo de la quiralidad de los nudos de ADN presentes en muestras biológicas. Los resultados con minicromosomas de levadura descartarían una organización quiral y regular de las fibras de nucleosomas nativas in vivo.