Mecanismos moleculares de la tolerancia central

Resumen

Las especificidades del repertorio T se generan mediante la recombinación de segmentos génicos al azar por lo que un porcentaje de células son autoreactivas. La tolerancia del repertorio T hacia las moléculas propias se consigue en primera instancia mediante la selección tímica. El fenómeno de la expresión promiscua consiste en la expresión intratímica de autoantígenos periféricos propios de otros tejidos. Las células medulares tímicas, principalmente, serían las células encargadas de expresar estos autoantígenos. El gen AIRE es un factor de transcripción que se expresa principalmente en las celulas epiteliales medulares y que es responsable de regular la expresión promiscua en el timo. Este gen codifica para una proteina con dedos de zinc que ejerce su función regulando el nivel de transcripcion de los genes expresados promiscuamente, aunque todavía no está bien establecido el modelo de actuación. Otro nivel de regulación de la expresión génica se daría a nivel post-transcripcional donde la labilidad del tránscrito jugaría un papel importante de control. Los motivos AU son elementos de inestabilidad del tránscrito localizados en la zona 3' no traducida del gen y son signo de alto recambio y vida media corta del mensajero. Los genes que contienen motivos AU son de gran interés biológico ya que frecuentemente se encuentran en factores de transcripción, citocinas y oncogenes. Los objetivos de la tesis son: Diseñar un método para identificar genes con motivos AU en el timo con expresión diferencial en activación. Caracterizar un gen identificado mediante el objetivo anterior, ZNF304, a nivel de secuencia y análisis inicial en activación linfocitaria. Comprobar la expresión promiscua del gen de la insulina en el timo humano y el papel de los polimorfismos VNTR de su región promotora como locus de susceptibilidad establecido. Analizar la expresión del gen AIRE relacionándolo con la expresión del gen de la insulina como ejemplo de autoantígeno regulado por él y relacionar la influencia de AIRE y de los polimorfismos de insulina en la cantidad de mensajero final. Diseñamos un método llamado AU-DD válido para identificar genes con motivos AU y de ensayar la expresión diferencial de los mismos bajo diferentes estímulos. Secuenciamos el gen ZNF304, un gen con motivos dedos de zinc y caja KRAB. La caja KRAB está relacionada con represión transcripcional. El gen se expresaba principalmente en tejidos linfoides y la caracterización inicial a nivel de expresión en activación en mononucleares de sangre periférica daba como resultado una activación de modulación bifásica, con rápida respuesta a los 30 minutos de inducción y otro pico a las 6 horas que coincidía con el pico de activación de las citocinas. Detectamos mensajero de insulina en todas las muestras de timo total analizadas. Tipamos las muestras en función al polimorfismo VNTR que está en desequilibrio de unión con el polimorfismo PstI, fácilmente analizable mediante restricción de la zona no traducida del gen de la insulina. El alelo VNTR clase III, protector dominante de la diabetes tipo 1, producía mayor cantidad de insulina que el alelo que predispone, el de clase I. El nivel de insulina en el timo era variable de forma interindividual y ello correlacionaba con el nivel de expresión del gen AIRE dentro de la misma muestra analizada.