Caracterización de los repertorios peptídicos asociados a hla-dr en tejido linfoide humanohomeostasis y tolerancia

Resumen

Hipótesis: para la generación eficiente de tolerancia central, los repertorios de péptidos presentados por MHC en el timo debería reflejar el total del proteoma del organismo. Por lo tanto, la transcripción de antígenos periféricos en timo debería corresponder con la presentación de péptidos de estos antígenos. Diferencias cuantitativas o cualitativas entre los péptidos presentados en el timo y en la periferia pueden constituir un factor desencadenante de autoinmunidad. Por tanto, para mantener la tolerancia, los péptidos más abundantes a nivel periférico deberían encontrarse también en el timo. El trabajo presentado en la tesis describe por primera vez el repertorio peptídico asociado a HLA-DR en timo, órgano linfoide primario donde se genera el repertorio de linfocitos T maduros, y en bazo, órgano linfoide secundario donde se centra la respuesta inmunitaria a antígenos de la sangre. Ambos repertorios están enriquecidos en péptidos derivados de proteínas ubicuas, abundantes en los estromas de cada tejido. Por norma general se presenta una única región de cada proteína, en detrimento del resto de la secuencia (immunodominancia). El estudio comparativo entre tejidos con idéntico tipaje para HLA-DR demostró que los péptidos procedentes de proteínas compartidas proceden de la misma región inmunodominante, lo que sugiere que estos péptidos tolerizados en timo son presentados a nivel periférico para el mantenimiento de la homeostasis. Mediante una metodología de predicción de afinidad de los péptidos asociados a HLA-DR desarrollada en el laboratorio, hemos descrito que los repertorios peptídicos presentados en timo y bazo están compuestos mayoritariamente por ligandos con una alta afinidad hacia las moléculas de DR que la presentan. En comparación con estos repertorios, los péptidos presentados por un tejido autoinmune humano presentan un alto porcentaje de péptidos de baja y media afinidad. A su vez, se han identificado por primera vez dos péptidos derivados de antígenos periféricos presentados por HLA-DR en timos humanos. Estos péptidos proceden de proteínas que son diana de enfermedades autoinmunes humanas. La expresión génica de ambas proteínas se limita a las células del epitelio medular tímico y se asocian de forma diferente al gen AIRE, considerado como el factor de transcripción más importante en la inducción de tolerancia frente a antígenos restringidos de tejido. Muestras y metodología: en colaboración con el Hospital de la Vall d¿Hebron y el servicio de trasplantes de la Corporació Sanitària Clínic, se obtuvieron y analizaron 6 muestras de timo procedentes de donantes pediátricos y 4 muestras de bazo de donantes cadavéricos sin patologías autoinmunes descritas en su historial médico. Las moléculas HLA-DR se purificaron y los péptidos se eluyeron en medio ácido. El repertorio fue analizado utilizando espectrometría de masas de alta resolución en colaboración con el laboratorio de proteómica del CSIC-UAB.